關于血清蛋白電泳——您知道多少(一)檢測技術
更新時間: 點擊:21510 所屬欄目:經驗分享 Update Time: Hits:21510 Belong Column:血清蛋白電泳(serum poteinelectrophoresis,SPE)是利用蛋白質的等電點和分子大小的不同,在同一PH值緩沖液中所帶電荷的差異性,在電場中泳動速度和方向不同,使不同的蛋白質分子具有不同的電泳遷移率,從而把血清蛋白分為不同的區帶,然后不同的區帶進行定量分析。
檢測方法
血清電泳的檢測方法有多種,有Tiselius自由電泳,醋酸纖維素膜電泳,瓊脂糖凝膠電泳,淀粉膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳,濃度梯度板狀膠電泳,微型雙向電泳,毛細管電泳等。電泳方法不同,分離血清蛋白的能力則有很大差異。目前,臨床實驗室檢測中采用的瓊脂糖凝膠電泳和毛細管電泳。
1. 瓊脂糖凝膠電泳法檢測血清蛋白電泳:
瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時因凝膠含水量大(98-99%),近似自由電泳,因為固體支持物的影響少,故電泳速度快,區帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團,電滲影響很少,是一種較好的電泳材料,分離效果較好。
瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡單。將血清蛋白樣本通過加樣梳點在瓊脂糖凝膠上然后將凝膠置于電場中,此時血清中的不同蛋白質就會在電場中發生移動,在電泳結束時根據使用緩沖液的不同,蛋白質被分五個區帶或六個區帶,然后將凝膠烘干,使用對蛋白親和力強的氨基黑燃料進行染色,通過光密度儀或掃描儀對各個區域的蛋白檢測,從而得到血清蛋白各組分的百分比濃度,也可以測定總蛋白的濃度后,計算出各個區帶的濃度值。

2. 毛細管電泳法檢測血清蛋白電泳:
毛細管電泳(Caillary Electrophoresis)簡稱CE,是一類以毛細管為分離通道,以高壓直流場為驅動力的新型液相分離分析技術。毛細管電泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出,他們使用了75mm的毛細管柱,用熒光檢測器對多種組分實現了分離。
毛細管電泳和高效液相色譜(HPLC)一樣,同是液相分離技術。無論從效率、自動化、檢測速度、樣品用量和成本來說,毛細管電泳都顯示了一定的優勢。毛細管電泳(CE)除了比其它色譜分離分析方法具有效率更高、速度更快、樣品和試劑耗量更少、應用面同樣廣泛等優點外,其儀器結構也比高效液相色譜(HPLC)簡單。
血清蛋白在使用毛細管電泳檢測后可以得到六個區帶,即將血清蛋白分為六個組分。

分類及參考區間
1. 瓊脂糖凝膠法分類:目前臨床實驗室使用瓊脂糖凝膠電泳檢測血清蛋白電泳主要分為5個區帶。具體分類與參考區間見下表:
2. 毛細管電泳法分類:血清蛋白電泳主要分為6個區帶。具體分類與參考區間見下表:

臨床應用
血清蛋白常被用做作為下列疾病監控和診斷。
1.急性感染性疾病
2.慢性感染性疾病
3.蛋白丟失類疾病,如腎臟疾病、胃腸道疾病、皮膚類疾?。齻∪耍B出液和漏出液相關疾病、肝臟疾病等
4.單克隆免疫球蛋白血癥(多發性骨髓瘤等疾?。?/span>
5.在常規實驗室可以觀察到的異常結果。紅細胞沉降率加快,蛋白尿,血清總蛋白濃度增高或降低。


